流式細胞技術
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、准確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之一。
流式細胞技術(flow cytometry,FCM)是利用流式細胞儀進行的一種單細胞定量分析和分選技術。流式細胞術是單克隆抗體及免疫細胞化學技術、激光和電子計算機科學等高度發展及綜合利用的高技術產物。
流式細胞儀由三部分構成
1.液流系統,包括流動室和液流驅動系統;
2.光學系統,包括激發光源和光束收集系統;
3.電子系統,包括光電轉換器和數據處理系統。
流式細胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經熒光標記的細胞或微粒逐個通過樣品池,同時由熒光探測器捕獲熒光信號並轉換成分別代表前向散射角、側向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號,經計算機處理形成相應的點圖,直方圖和加三維結構圖像進行分析。
用於FCM的樣本是單細胞懸液,可以是血液、懸浮細胞培養液、各種體液、新鮮實體瘤的單細胞懸液以及石蠟包埋組織的單細胞懸液等。
其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細胞 DNA含量、細胞體積、蛋白質含量、酶活性、細胞膜受體和表面抗原等許多重要參數。根據這些參數將不同性質的細胞分開,以獲得供生物學和醫學研究用的純細胞群體。
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