一、項目介紹
免疫組織化學IHC。
腫瘤一般流程，做HE常規染色，確認后進行針對性IHC檢測分析。
不同項目的染色位置不同，分為：核染，膜染和漿染。
二、乳腺癌案例
三種成因，對應三種檢測對象：
1.Her2，可采用羅氏靶向治療葯物赫塞丁針對性治療。
2.ER，主要因激素等原因導致的乳腺癌，術后通過調節內分泌有效治療方法。
3.PR，主要因激素等原因導致的乳腺癌，術后通過調節內分泌有效治療方法。
4. 三陰，以上三種測試結果均為陰性的腫瘤，原因不詳，可能與轉移有關，嚴重程度高。
三、檢測流程
1. 術后標本首先通過甲醛浸泡脫水，兩方面：
1.1 防止細菌滋生使標本腐爛
1.2 防止組織細胞內酶滲透出細胞壁，破壞細胞形態。
2. 包埋，將標本用蠟包埋，便於保存和切割。
3. 切片，將組織切片，2~3微米，用於測試。
3.1 切片機包含手動和自動，手動切片機內部通過鋼絲繞線，手動轉動過程進行拉伸。提供2~5微米調節旋鈕。
3.2 自動切片機，原理不詳，不排除齒輪方案。只提供特定厚度切換。
4. 上機脫蠟，由於蠟侵入組織，反應試劑無法進入，因此必須先脫蠟后才能反應。
4.1 設置溫度80度。
4.2 4分鍾清洗一次，清洗過程為：加-吹-加。
4.3 由於溶解蠟的液體性能一般，需要多次清洗。
5. 抗原修復，甲醛固定時會將位點粘連，導致無法與一抗結合，因此需要將位點打開，使用抗原修復液高溫修復。
5.1 高壓鍋方案溫度達到121度左右，手工常規方式。
5.2 一般采用三種方式修復：化學方法，微波方法和加熱方法。設備采用化學（抗原修復液和加熱組合方式）
5.3 上機95攝氏度方案同121度方案偏差不大。
5.4 干片問題，如果出現干片，容易導致組織皺縮，影響最后的組織觀察。
5.5 ER種類包括三種：PBS（緩沖液，ph7，磷酸鹽成分，容易結晶且難以去除，可使用84消毒液或冰乙酸溶解，容易使長菌，5天左右可出現藍-藻類、深色半點-霉菌）、CBS（ER1，ph6）、EDTA（ER2，ph9）
6. 添加ER過程中需要補液，由於抗原修復液中含有水和特殊物質，水沸點低，補液過程特殊物質濃度逐漸增加且殘留在玻片上，因此需要pbs進行單獨清洗。
7. 雙氧水，修復后的組織上存在一些類源性過氧化物酶，該物質同HRP使DAB顯色，影響判斷，因此通過雙氧水使之滅活。
8. 一抗，與組織上的抗原結合。
8.1 注：此時干片將導致一抗試劑附着在組織上，清洗步驟難以清洗導致非特異性顯色。
8.2 由於一抗試劑量較少，控制時間和溫度。20~30度。低於20度將減緩反應速度。溫度過高（40或更高）將使期失活。
9 二抗、與已結合的一抗結合。
10. 三抗，一端與二抗結合，另外一段包含辣根HRP，能夠使侵入的dab顯色。
11. dab，將標記待測物（三抗），配置dab的成分為色源和雙氧水，需要提前配置和充分攪拌。
11.1 對於大量dab配置時，可采用分層吸排的攪拌方案。
12. 蘇木素，紫紅色，用於對細胞形態進行染色。如果試劑環境存在溫差（不能加熱）將出現沉淀。
13. 返藍，可通過加特殊試劑（或自來水沖洗，含氯），加速蘇木素變色，變為天藍色。便於顯微鏡觀察。
14. 透明，使用酒精清洗將玻片中的水互溶，並蒸發帶走，封片使用的中性樹脂和二甲苯不溶於水，封片容易出現氣泡和分層。影響觀察。
15. 封片，加中性樹脂和蓋玻片。
三、試劑篇
脫蠟液：用於將組織上的蠟去除，臘熔點60度。
抗原修復液，用於將組織上被甲醛粘連的位點打開。
一抗：CD-3，在甲狀腺腫B淋巴細胞，上包含該物質，將該物質打入小鼠體內產生抗體，作為CD-3一抗試劑。用於檢測組織上是否存在CD-3。
二抗：一抗抗體，可以與一抗結合。作用：放大。
三抗：二抗抗體並攜帶用於激發DAB顯色的HRP，可以與二抗結合。作用：放大和顯色
DAB：染色液，被三抗激發顯色。
蘇木素：對細胞常規形態進行染色，原色紫紅，反藍后天藍色。
酒精：透明，將組織上水分帶走，避免封片時中性樹脂和水不溶解產生氣泡或隔層。