酶聯免疫吸附實驗法采用酶標記技術，使待測標本與事先包被在塑料凹孔板內的相應抗原或抗體相結合，形成免疫復合物。酶標抗原或抗體與此結合形成酶標記的免疫復合物。當加入酶的相應底物時，由於酶的催化作用，呈現顏色反應。顏色的深淺與相應的抗原或抗體的量成正比。
這樣，原來人體中無色的抗原或抗體，與酶聯接后仍保持免疫和酶的活性。當加入底物后，能使底物顯色。抗原或抗體的含量越高，顏色就越深。這樣，便可根據所生成的顏色的深淺，來分析抗原或抗體的含量。
酶標法（並稱固相酶免疫測定）可用於測定抗原，也可用於測定抗體。在這種測定方法中有3個必要的試劑：固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以檢測的具體條件，可設計出各種不同的檢測方法。現介紹3種最常用的方法。
（一）抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，圖1為其示意圖。具體操作步驟如下：
圖1 雙抗體夾心法測抗原示意圖
（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。然后洗滌除去未結合的抗體及雜質。
（2）加受檢標本使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。然后洗滌除去其他未結合的物質。
（3）加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。然后徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時，固相載體上帶有的酶量就代表標本中受檢抗原的量。
（4）加底物顯色。夾心式復合物中的酶催化底物變為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
本法只適用於二價或二價以上大分子抗原的檢出和定量分析，而不能用於半抗原等小分子的測定。
（二）間接法
間接法是檢測抗體最常用的方法，圖2為其示意圖。其原理為利用酶標記的抗體來檢測已與固相抗原結合的受檢抗體。操作步驟如下：
圖2 間接法測抗體示意圖
（1）將特異體抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。然后洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清，使血清中的特異性抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶標抗免疫球蛋白（酶標抗體），它與固相復合物中的抗體相結合，從而使該抗體間接地標記上酶。清洗后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。
（4）加底物顯色，顏色深度代表標本中受檢抗體量。
（三）競爭法
競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此，結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成正比，其示意圖如圖3所示。具體操作步驟為：
圖3 競爭法測抗原示意圖
（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。然后洗滌。
（2）在待測管中加入受檢標本與一定量的酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。若受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。若受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合。這樣，受檢標本中抗原量越高，則由於這些抗原與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相抗體結合的機會，使酶標抗原與固相抗體的結合量越少。“參考管”中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。然后洗滌。
（3）加底物顯色。參考管中由於結合的酶標抗原量最多，故顏色最深。參考管中顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本中抗原的量。待測管越淡，表示標本中抗原量越多。