酵母單雜交 (Y1H) 試驗

本文轉載自查看原文 2021-11-29 21:30 3463

1.葉綠素熒光參數： Fv/Fm反映植物的潛在最大光合能力

2. 酵母單雜交：是研究DNA與蛋白質之間的關系

將編碼待測蛋白和AD的融合載體導入細胞，如果靶蛋白與順勢作用元件結合，那么報告基因表達。

誘餌是啟動子，想找上游調控蛋白，獵物是蛋白

將編碼待測蛋白和AD的融合載體導入細胞，如果靶蛋白與誘餌結合，那么報告基因表達。

3.motif：真核生物基因在無轉錄因子時處於不表達狀態，只有轉錄因子結合到識別DNA序列上后，基因表達。轉錄因子結合在基因的啟動子區域，啟動轉錄。

轉錄因子的結合位點：與轉錄因子結合的DNA（motif）

4.單雜交篩選應用（pAbAi 體系）
單雜原理：誘餌序列克隆到pAbAi 載體形成pBait-AbAi，通過同源重組整合到Y1Hgold 基因組上，當獵
物蛋白與誘餌發生互作后，會激活重組酵母菌AbAr基因的表達，使酵母菌對金擔子素產生抗性，以此來
篩選互作蛋白。金擔子素A（AureobasidinA，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No.R106 中分離出來的環
酯肽類抗生素，具有很強的抗真菌能力。

5.酵母選擇性營養缺陷型培養基

缺陷培養基（SD一缺二缺三缺四缺五缺培養基）的配方，就是在完全培養基的配方上去除對應的缺陷型組分。

6.凝膠遷移或電泳遷移率實驗 (EMSA)

研究核酸與蛋白質相互作用的技術。當蛋白與特異性DNA或RNA結合后，其在凝膠中的遷移率將小於未結合蛋白的核酸。

7.染色質免疫沉淀 (ChIP) 測定

在體內研究核酸與蛋白質相互作用的技術。

8.雙熒光素酶

熒光素酶與底物結合發生化學發光反應。

9.修改圖片中的字

10雙熒光素酶 (LUC) 測定

酶的亮度與基因的表達水平有關。

熒光素酶（Luciferase）是生物體內催化熒光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化發光的一類酶的總稱。熒光素酶是靠酶和底物的相互反應發光

雙熒光素酶報告基因檢測系統在原有的基礎上引入了海腎報告基因，可以排除不同組之間細胞生長狀況、細胞數目以及轉染效率帶來的干擾，起到校正的作用，從而使實驗結果更為可靠

兩者可催化各自的底物發生氧化作用產生生物熒光，產生的熒光數值大小即表示了兩種酶的表達量多少。

Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被稱為報告基因，是因為在基因表達調控研究時，利用兩者表達產生的熒光比值可以監控、證實微觀層面上的分子間的相互作用。具體做法是：將靶基因的轉錄調控元件或5’啟動子區克隆在Firefly luciferase基因的上游

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