酵母单杂交 (Y1H) 试验

 

1.叶绿素荧光参数： Fv/Fm反映植物的潜在最大光合能力

 

2. 酵母单杂交：是研究DNA与蛋白质之间的关系

将编码待测蛋白和AD的融合载体导入细胞，如果靶蛋白与顺势作用元件结合，那么报告基因表达。

 

 诱饵是启动子，想找上游调控蛋白，猎物是蛋白

将编码待测蛋白和AD的融合载体导入细胞，如果靶蛋白与诱饵结合，那么报告基因表达。

 

 

3.motif：真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，只有转录因子结合到识别DNA序列上后，基因表达。转录因子结合在基因的启动子区域，启动转录。

 转录因子的结合位点：与转录因子结合的DNA（motif）

 

 

 

 4.单杂交筛选应用（pAbAi 体系）
单杂原理：诱饵序列克隆到pAbAi 载体形成pBait-AbAi，通过同源重组整合到Y1Hgold 基因组上，当猎
物蛋白与诱饵发生互作后，会激活重组酵母菌AbAr基因的表达，使酵母菌对金担子素产生抗性，以此来
筛选互作蛋白。金担子素A（AureobasidinA，AbA）是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No.R106 中分离出来的环
酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。

5.酵母选择性营养缺陷型培养基

缺陷培养基（SD一缺二缺三缺四缺五缺培养基）的配方，就是在完全培养基的配方上去除对应的缺陷型组分。

 6.凝胶迁移或电泳迁移率实验 (EMSA)

研究核酸与蛋白质相互作用的技术。当蛋白与特异性DNA或RNA结合后，其在凝胶中的迁移率将小于未结合蛋白的核酸。

7.染色质免疫沉淀 (ChIP) 测定

在体内研究核酸与蛋白质相互作用的技术。

8.双荧光素酶

荧光素酶与底物结合发生化学发光反应。

9.修改图片中的字

AI

10双荧光素酶 (LUC) 测定

酶的亮度与基因的表达水平有关。

荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光

 双荧光素酶报告基因检测系统在原有的基础上引入了海肾报告基因，可以排除不同组之间细胞生长状况、细胞数目以及转染效率带来的干扰，起到校正的作用，从而使实验结果更为可靠

两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光，产生的荧光数值大小即表示了两种酶的表达量多少。

Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因，是因为在基因表达调控研究时，利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是：将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游