摘 要：
多位點序列分型（MLST）是一種基於核酸序列測定的細菌分型方法，通過PCR擴增多個管家基因內部片段，測定其序列，分析菌株的變異，從而進行分型。MLST被廣泛應用於病原菌、環境菌和真核生物中。與傳統分子生物學分型方法相比，MLST操作簡單，具有更高的分辨力，能將同種細菌分為更多的亞型，並確定不同ST型之間的系統發育關系以及與疾病的聯系。
關鍵詞： 多位點序列分型
多位點序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)是一種基於核酸序列測定的細菌分型方法，通過PCR擴增多個管家基因內部片段，測定其序列，分析菌株的變異，從而進行分型。MLST是由多位點酶電泳（MLEE）衍生出來的一種分型方法，由Maiden等研究設計，於1998年首先應用於自然變異是的腦膜炎奈色球菌（Neisseria meningitides），后來被廣泛應用於其它病原菌、環境菌和真核生物中。
與傳統分子生物學分型方法相比，MLST具有更高的分辨力，能將同種細菌分為更多的亞型，並確定不同ST型之間的系統發育關系以及與疾病的聯系。MLST操作簡單，結果能快速得到並且便於不同實驗室的比較，已經用於多種細菌的流行病學監測和進化研究。隨着測序速度的加快和成本的降低，以及分析軟件的發展，MLST逐漸成為細菌的常規分型方法。MLST越來越多的被作為能進行國際間菌株比較的常用工具，建立一種更為准確的分型系統方法。MLST目前已經成為了細菌分子流行病學研究的一種重要方法，可通過數據庫與其它國家和地區的研究結果進行比對，從而更加全面的認識本地區細菌流行的特征。
多位點序列分型的原理：MLST方法一般測定6~10個管家基因內部400~600bp的核苷酸序列，每個位點的序列根據其發現的時間順序賦予一個等位基因編號，每一株菌的等位基因編號按照指定的順序排列就是它的等位基因譜，也就是這株菌的序列型（sequence type，ST）。這樣得到的每個ST均代表一組單獨的核苷酸序列信息。通過比較ST可以發現菌株的相關性，即密切相關菌株具有相同的ST或僅有極個別基因位點不同的ST，而不相關菌株的ST至少有3個或3個以上基因位點不同。
MLST分析方法：MLST技術針對看家基因設計引物對其進行PCR擴增和測序，得出每個菌株各個位點的等位基因數值，然后進行等位基因圖譜(allelic profile)或序列類型(sequence types，STs)鑒定，再根據等位基因圖譜使用配對差異矩陣(matrix pair-wise differences)等方法構建系統樹圖進行聚類分析。
MLST分析方案設計要素：（1）選擇經過初步篩選的菌株；（2）選擇具有獨特特征的基因位點；（3）設計用於基因擴增和序列測定的引物。
實際運用中，對於已有的成熟MLST方案的細菌，可直接從MLST數據庫（http://pubmlst.org/）中獲取分型方案。