在进行基因定位时，有时候需要扩增某个基因的全长，查看基因在两个极端池中的突变位点，以及判断基因是否为目的基因。此时，我们需要扩增出基因的全长
因此，需要在5’端UTR和3‘端UTR区域设计引物。
以甘蓝为例，在TO1000数据库网站（http://plants.ensembl.org/Brassica_oleracea/Info/Index）或者02-12数据库网站（http://brassicadb.cn/#/）下载该基因及其前后500bp序列
TO1000：
BRAD（02-12）
在Word文档中，用中括号[]将需要扩增的片段括起来，也就是在基因的 起始密码子前加上[ 以及 终止密码子后加上]
随后，将整段序列（包括5'和3’）复制，输入到Primer3的序列输入框中：
接着，设计引物的Tm值和引物长度：
但是，最最最最最最最最最最重要的是，别忘了设计产物大小，如果产物大小没有设置正确，无论如何也不会设计出引物！！！！！！！笔者的血泪教训！！！
