在提取生物總RNA的過程中,被提取的RNA主要包含三類——rRNA,tRNA,和mRNA。
無論是在真核生物細胞中還是在原核生物細胞中,80%-85%的RNA都是rRNA,即核糖體RNA,是組成核糖體的主要成分。
原核生物的核糖體所含的rRNA有5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA三種。
真核生物的核糖體所含的rRNA有5S rRNA、5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA四種。
從真核生物中提取到的RNA大部分都是大片段的18S rRNA、28S rRNA,而5S rRNA、5.8S rRNA、tRNA由於分子量較小,所以比較難回收到。
如果5S RNA位置的條帶亮度很高,則表示18S rRNA、28S rRNA出現降解。
為什么RNA容易降解呢?
首先,RNA是單鏈結構,不像DNA雙鏈結構那么穩定。其次,無論是內源性的RNA酶還是外源性的RNA酶都非常多,且活性強。
RNA酶(RNase)是一種內切核糖核酸酶,可以在C和U殘基位置特異性降解單鏈RNA。RNA酶是一種小分子的蛋白,且結構中具有二硫鍵,因此非常穩定,熱變性后可以很快恢復構象。
RNA酶是生物進化出的一種防御機制,用來防御外源RNA的入侵。外源RNA的轉錄和翻譯會給細胞帶來致命性的傷害。因此,生物都分泌出大量的RNA酶,如人體的唾液、眼淚以及皮膚表面都布滿了RNA酶,被接觸過的物體上也存留着穩定的RNA酶。
因此,在提取RNA的過程中要注意嚴格防止RNA酶的降解。
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