糖酵解發生在細胞質基質中，在此以葡萄糖為起始位置為例。
整個糖酵解途徑由兩個階段十個反應組成：（1）引發階段，共五步反應，一分子葡萄糖經過1,6-二磷酸果糖轉變成2分子3-磷酸甘油醛，共消耗2分子ATP（投資階段）。（2）產能階段，共五步反應，二分子3-磷酸甘油醛最終轉變為2分子丙酮酸，同時產生4分子ATP和2分子NADH（獲利階段）。
一階段
1.葡糖糖的磷酸化
在己糖激酶或葡萄糖激酶催化下，葡萄糖磷酸化為6-磷酸葡萄糖。此反應不可逆。
降低胞內葡萄糖濃度，有利於胞外葡萄糖進入胞內。葡萄糖帶上負電荷，極性增加，不易出細胞。葡萄糖變不穩定，有利於下一步反應。
2.6-磷酸葡萄糖異構化
在磷酸己糖異構酶的催化下，6-磷酸葡萄糖異構為6-磷酸果糖，此反應可逆。
醛糖變為酮糖，羰基從一號位變到二號位，為下一步磷酸化創造條件，也有利於之后C3和C4之間的斷裂反應。
3.磷酸果糖的激活
在磷酸果糖激酶-1的催化下，6-磷酸果糖變為1,6-二磷酸果糖，此反應不可逆。
為限速步驟，通過對此酶的調節，從而調控整個糖酵解。
4.1,6-二磷酸果糖裂解
在醛縮酶的催化下，1分子六碳糖裂解成1分子磷酸二羥丙酮和一分子3-磷酸苷油醛，此反應可逆。
5.磷酸丙糖的異構化
在磷酸丙糖異構酶的催化下，將磷酸二羥丙酮變為3-磷酸苷油醛，為可逆反應。
二階段
6.3-磷酸苷油醛氧化及磷酸化
在3-磷酸苷油醛脫氫酶的催化下，3-磷酸苷油醛變為1,3-二磷酸甘油酸，這是糖酵解途徑中唯一的一步氧化還原反應，此反應可逆。
在這個反應中，醛基變成羧基，釋放出的能量一部分儲存在1,3-BPG的高能磷酸鍵，另一部分被NADH中的高能電子帶走。
7.1,3-二磷酸甘油酸的底物水平磷酸化
在磷酸甘油酸激酶與鎂離子的催化下，1,3-二磷酸甘油酸變為3-磷酸甘油酸，並產生ATP，此反應可逆。
8.3-磷酸甘油酸的異構化
在磷酸甘油酸變位酶的催化下，3-磷酸甘油酸轉變為2-磷酸甘油酸，此反應可逆。
9.2-磷酸甘油酸的烯醇化
在烯醇化酶的催化下，2-磷酸甘油酸轉變為磷酸烯醇式丙酮酸，此反應可逆。
使某些原子重排，能量富集到一個化學鍵上。
10.磷酸烯醇式丙酮酸底物水平磷酸化
在丙酮酸激酶的催化下，磷酸烯醇式丙酮酸轉變為丙酮酸，產生ATP，此反應不可逆。
