數字PCR即Digital PCR,它是是一種核酸分子絕對定量技術。數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的絕對定量。
在定量PCR時,我們常常糾結一個問題,究竟是相對定量還是絕對定量呢?現在我們再也不需要去糾結這個問題了,因為數字PCR幫我們解決了。盡管這兩種技術有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標准曲線或參照基因來測定核酸量,而數字 PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的絕對定量。
數字PCR技術的原理
數字PCR(也可稱單分子PCR)一般包括兩部分內容,即PCR擴增和熒光信號分析。在PCR擴增階段,與傳統技術不同,數字PCR一般需要將樣品稀釋到單分子水平,並平均分配到幾十至幾萬個單元中進行反應。不同於qPCR對每個循環進行實時熒光測定的方法,數字PCR技術是在擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集。最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量。
圖1.數字PCR技術原理:A: 數字PCR過程,第一步稀釋樣本分配至每個反應單元進行PCR反應,第二步熒光檢測;B:分子信標
基因突變分析原理;C:BEAMing檢測原理。